数字PCR在病原微生物检测方法

数字PCR,微生物

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病原体(pathogens)是指可造成人或动植物感染疾病的微生物(包括细菌、病毒、立克次氏体、真菌)、寄生虫或其他媒介(微生物重组体包括杂交体或突变体)。(来源:百度百科

传统的病原体检测金标准方法是“涂片镜检法+分离培养法”,但这种方法耗时长,细菌培养一般需要1-3天,真菌培养一般需要1-3周,对于发病较快结核杆菌等则需要1个月,同时还存在镜检和分离培养等方法还不易对相关病原体进行分型检测的问题,特别是临床上对于急性感染疾病一般无法用这种方法在就诊前获得检测结果。



随着技术的发展,陆续出现了分子诊断技术、免疫学检测方法和化学法检测等病原体检测手段,目前使用最多的是分子诊断技术。第三代PCR技术-数字PCR,作为分子诊断领域的佼佼者,在病原体核酸检测方面彰显出巨大优势:

1、摆脱病原微生物检测对标准品的依赖

病毒等微生物的载量对于阐释疾病病程,后续治疗及疗效评估是至关重要的, qpcr技术的最大瓶颈在于需要依赖标准曲线,而且扩增效率的差异会直接导致实验室内或者不同实验室之间的荧光定量PCR检测结果的偏差。数字PCR基于单分子层面的检测可以摆脱对标准品的依赖,且不受PCR抑制物的影响,尤其是在缺乏标准品的检测项目中,数字PCR可用于直接定量病原微生物的拷贝数。

2、灵敏度高

在病原微生物的检测方面,数字PCR利用其灵敏度高的特点,对各种样品中的病原微生物展开广泛的研究,可以用于早期诊断和用药的低拷贝病毒的监控。如人类免疫缺陷病毒(HIV)抗逆转录病毒治疗过程中病毒残留的监控;抗甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染监控。(详细内容见文末相关文章链接)

3、大大缩短报告周期

使用数字PCR检测临床标本无需经过病原微生物培养过程,大大缩短了报告周期,使快速检测潜在的病原微生物成为可能,且利于从大量不同的背景核酸中检出病原微生物,对于感染性疾病的诊断和控制意义重大,有助于及时减少患者服用无效药物的数量,及早采用其他备用药物。

naica®微滴芯片数字PCR系统

法国Stilla Technologies公司naica®微滴芯片数字PCR系统,源于Crystal微滴芯片数字PCR技术,自动化微滴生成和扩增,每个样本孔可实现6荧光通道的检测,智能化识别微滴并进行质控,3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度,融合传统微滴式和芯片式优势,被称为下一代数字PCR技术。